全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀破碎大腸桿菌的細(xì)胞壁
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
對(duì)大腸桿菌進(jìn)行破壁,提取其蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)原理
通過研磨珠的撞擊,破碎大腸桿菌的細(xì)胞壁,使其內(nèi)容物流出,進(jìn)而提取其蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)材料和器具
樣品:大腸桿菌
儀器:全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀(上海凈信,JXFSTPRP-96)
耗材:離心管,研磨珠(上海凈信,1號(hào))
實(shí)驗(yàn)步驟
1.IPTG誘導(dǎo)表達(dá)的大腸桿菌細(xì)胞經(jīng)離心后棄沉淀,在加入2體積 PBS重懸細(xì)胞團(tuán)塊后,以移液槍將其加入含有1號(hào)玻璃研磨珠的離心管中;
2.將上述離心管放入多樣品組織研磨機(jī)中,在13單位振頻條件下震蕩90s;
3.取出離心管在4o c離心,保存上清液S1,以備上述檢測(cè);
4.向每個(gè)1號(hào)玻璃珠離心管中加入0.2ml 8M 尿素溶液后,再放入多樣品組織研磨機(jī)中,在13單位振頻條件下震蕩90s,可見混濁液變清;
5.離心后收集上清液S2與S1(各0.002ml)在SDS-Page上電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖注:泳道3:marker
泳道2:0號(hào)對(duì)照
泳道1:含8M尿素上清
泳道0:bingding buffer 上清
泳道 0 1 2 3
本蛋白形成包涵體,在使用此研磨機(jī)后進(jìn)行上樣電泳。圖譜清晰,說明本研磨機(jī)適用于含包涵體菌體的破碎。
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