通過對擬南芥或水稻穗的研磨來提取dna的實驗方法
實驗?zāi)康?/strong>
對擬南芥或水稻穗進行研磨破碎,進而提取其DNA。
實驗原理
通過研磨珠的撞擊,充分擬南芥或水稻穗細胞,使其內(nèi)容物流出,進而提取目標(biāo)成分。
實驗材料和器具
樣品:擬南芥或水稻穗
儀器:全自動樣品冷凍研磨儀(上海凈信,Tissuelyser-48)
耗材:離心管,不銹鋼研磨珠(上海凈信)
試劑:TPS溶液(100mM Tris-Cl (pH 8.0),10mM EDTA (pH 8.0),1M KCl)
實驗步驟
1.取一片擬南芥的葉片(或10d左右的小苗),加入兩毫升EP管中。
2.加鋼珠1顆
3.加TPS提取液0.02ml
4.設(shè)置研磨儀參數(shù)10單位頻振,1min。(水稻嫩葉設(shè)置45S,12單位頻振;老葉設(shè)置70S,12單位頻振)
5.離心(4000rpm,1min),將打碎的組織和提取液一起轉(zhuǎn)移至96孔板中。
6.96孔板加蓋子,75°加熱15min
7.大離心機高轉(zhuǎn)速10min
8.取上清,轉(zhuǎn)入另一塊96孔板,加入等體積的異丙醇。
9.加蓋子,混勻
10.4°下10min或-20°下10min,如材料很多此步驟可省略。
11.最高轉(zhuǎn)速離心10min。
12.棄上清,加入0.04ml 70%乙醇。
13.最高轉(zhuǎn)速離心10min
14.棄去乙醇,37°放置20-30min烘干
15.加入0.016ml水,65°放置10min
16.離心除去氣泡,之后可以直接用于PCR實驗。
實驗注意事項
1.-20°下該方法的DNA可以保存4個月以上,4°大致可以放2-3周。
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