高通量組織研磨儀樣品采集及制備研磨條件
在之前的研究中發(fā)現(xiàn)葡萄和葡萄制品的重金屬污染嚴(yán)重,近來研究表明蘋果汁和葡萄酒中均發(fā)現(xiàn)砷超標(biāo),特別是砷酸鉛。早在20世紀(jì)40年代時就被廣泛應(yīng)用于數(shù)百萬英畝的農(nóng)作物上,屬于果園中常用的農(nóng)藥,因此被污染的可能性依然存在。
實驗過程:
1、將準(zhǔn)備好的干果樣品放入高通量組織研磨儀中;
2、放入適配的研磨珠與研磨管等;
3、設(shè)置研磨參數(shù)、時間、頻率后即可開啟;
4、開啟后等待研磨結(jié)束,取出樣品檢查后可做后續(xù)的DNA和RNA提取實驗;
重金屬農(nóng)藥最初被設(shè)計成持久性的農(nóng)藥,以至于在被禁用幾十年后,仍會造成環(huán)境和健康問題,由于當(dāng)下社會的環(huán)境變化,越來越多的人重視食品的安全性,而干果作為一種營養(yǎng)豐富且美味的食物,在市場上深受用戶喜愛。后續(xù)采集新鮮動物組織樣本,修剪至約50-100mg濕重,在液氮中快速冷凍,并保持在-80℃低溫冰箱中,樣品來自于人、狗、貓、老鼠、牛、馬,還有魚和蛤,在提取DNA或RNA之前,將這些冷凍后的組織,放入深孔板中,并將深孔板放置在干冰上冷凍。
每個孔中放入兩顆鋼珠,再加入緩沖液應(yīng)用生物系統(tǒng)核酸純化裂解緩沖液,用深孔板蓋板密封,在高通量組織研磨儀上以每分鐘1000次的速度研磨后在進(jìn)行培養(yǎng),用裂解液提取,使用高通量組織研磨儀優(yōu)化后,再使用全自動核酸設(shè)備進(jìn)行實時PCR,就可以提取RNA和DNA。
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