多樣品組織研磨機(jī)使用方法步驟及注意事項(xiàng)有哪些?
在實(shí)驗(yàn)室中多樣品組織研磨機(jī)的使用率很高,其中對于動(dòng)物的研究課題實(shí)驗(yàn)也不例外,這種類型的研究在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前往往需要先將動(dòng)物組織進(jìn)行樣品前處理操作,這時(shí)就會(huì)使用樣品研磨機(jī),得到的處理結(jié)果也會(huì)更準(zhǔn)確快速。
但是在進(jìn)行樣品處理時(shí)需要做好如下操作:
1、在實(shí)驗(yàn)操作前,先將PBS緩沖液進(jìn)行4℃預(yù)冷,然后準(zhǔn)備若干冰塊備用;使用75%濃度的乙醇溶液對鑷子、剪刀進(jìn)行消毒處理,如果還需對動(dòng)物組織進(jìn)行RNA提取,還要使用酒精燈對鑷子和剪刀進(jìn)行再次消毒,以盡可能消除RNA酶?! ?/p>
2、所有實(shí)驗(yàn)耗材都應(yīng)進(jìn)行高溫高壓滅菌,以保證各種酶不會(huì)對后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響;將2ml離心管置于冰塊上,并加入適量的PBS緩沖液,一般情況下,實(shí)驗(yàn)所需的組織勻漿的質(zhì)量體積比為10%(即0.1g組織樣本加入1ml液體)?! ?/p>
3、將需要進(jìn)行研磨的組織樣本從零下80℃的冰箱內(nèi)取出,置于冰上,使用滅菌后的鑷子和剪刀,將樣本切成小塊(每塊重量不宜超過0.02g,總重量不宜超過0.2g),然后放入加好相應(yīng)液體的離心管中,備用;取出已經(jīng)滅菌的氧化鋯研磨球,按照每個(gè)離心管一顆的數(shù)量,將鋯球放入離心管中。此過程需使用鑷子進(jìn)行該操作,并且盡量避免液體飛濺而導(dǎo)致樣本污染。
使用多樣品組織研磨機(jī)處理動(dòng)物組織的方法步驟如下:
放入樣品和鉛球的離心管標(biāo)記好編號,然后放入專用的研磨適配器中,蓋好蓋子,將適配器固定在研磨機(jī)上,設(shè)置振動(dòng)頻率為1000次/分鐘,振動(dòng)時(shí)間為5分鐘。
但由于振動(dòng)過程中的撞擊和摩擦,會(huì)產(chǎn)生大量熱量,使得離心管溫度升高,所以可以選擇具有低溫控制功能的設(shè)備,或者將適配器放入液氮罐進(jìn)行預(yù)冷凍,并減少研磨時(shí)間,避免高溫對樣本的破壞。
使用多樣品組織研磨機(jī)切勿盲目操作設(shè)備,以免研磨結(jié)果不理想,效果不準(zhǔn)確:我們在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的時(shí)候由于樣品的特殊性,因此 要在低溫狀態(tài)下進(jìn)行,以達(dá)到降低樣本中的蛋白質(zhì)、DNA的降解速度。所有實(shí)驗(yàn)操作均需要佩戴醫(yī)用口罩、手套,實(shí)驗(yàn)服,在進(jìn)行離心操作前,提前開機(jī)進(jìn)行預(yù)冷,保持4℃左右的低溫環(huán)境,研磨過程中注意研磨球不要放多,以免導(dǎo)致管壁破裂,造成樣品的丟失及污染。
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